Karya ini diduga telah dimulai sekitar tahun 1495-1496 dan dipesankan sebagai bagian dari rencana renovasi gereja dan bangunan konvennya oleh penyokong Leonardo, Ludovico Sforza, Adipati Milan. Lukisan ini menggambarkan suasana Perjamuan TerakhirYesus dengan para rasulnya, seperti yang diceritakan dalam Injil Yohanes, 13:21.[2] Leonardo telah melukiskan kekhawatiran yang terjadi di antara Dua Belas Murid ketika Yesus mengumumkan bahwa salah satu dari mereka akan mengkhianatinya.
Dikarenakan metode yang digunakan, berbagai faktor lingkungan, dan kerusakan yang disengaja, sangat sedikit lukisan asli yang masih ada sampai sekarang meskipun banyaknya upaya restorasi, yang terakhir diselesaikan pada tahun 1999.