Die Saison 2000/01 der Regionalliga war die siebte Spielzeit der Regionalliga als dritthöchste Spielklasse im deutschen Fußball. Es wurde erstmals in zwei regionalen Staffeln – Nord und Süd – mit jeweils 18 Mannschaften gespielt.
Die Meister sowie Vizemeister der Staffeln Nord und Süd stiegen direkt in die 2. Bundesliga auf.
Die Nord-Staffel spielte in der Saison 2000/01 mit 19 Mannschaften. Dem 1. FC Union Berlin gelang mit dem Gewinn der Meisterschaft der Aufstieg in die 2. Bundesliga. Die Vizemeisterschaft und ebenfalls den Aufstieg sicherte sich der SV Babelsberg 03. Aufsehen erregte Union Berlin in dieser Spielzeit auch, weil der Verein ins DFB-Pokal-Finale einzog und sich die Teilnahme am UEFA-Pokal sicherte.
Der SV Wilhelmshaven erhielt für die folgende Spielzeit wegen nicht fristgerecht eingereichter Unterlagen keine Lizenz und musste zwangsabsteigen.
2
Der FC Sachsen Leipzig erhielt für die folgende Spielzeit aus finanziellen Gründen keine Lizenz und musste zwangsabsteigen.
Kreuztabelle
Die Kreuztabelle stellt die Ergebnisse aller Spiele dieser Saison dar. Die Heimmannschaft ist in der linken Spalte, die Gastmannschaft in der oberen Zeile aufgelistet.
Daniel Teixeira wechselte in der Winterpause vom KFC Uerdingen 05 zum 1. FC Union Berlin.
Süd
Die Süd-Staffel spielte in der Saison 2000/01 mit 18 Mannschaften. Dem Karlsruher SC gelang mit dem Gewinn der Meisterschaft der direkte Wiederaufstieg in die 2. Bundesliga. Die Vizemeisterschaft sicherten sich die Amateure des VfB Stuttgart, die aufgrund ihres Status als Amateurmannschaft eines Profiklubs gemäß den Statuten des DFB kein Aufstiegsrecht besaßen. Dadurch stieg der Drittplatzierte 1. FC Schweinfurt 05 neben Karlsruhe auf.
Die Kreuztabelle stellt die Ergebnisse aller Spiele dieser Saison dar. Die Heimmannschaft ist in der linken Spalte, die Gastmannschaft in der oberen Zeile aufgelistet.