Se enriqueció con el gabinete de curiosidades que heredó de su padre, gracias a adquisiciones hechas en América como el manto de ceremonias del jefe amerindioPowhatan.
A la muerte de su padre, le sucede como jardinero jefe de los jardines del rey Carlos I de Inglaterra (1600-1649) y de la reina Enriqueta María de Francia. Esos jardines se sitúan en "Queen's House, Greenwich", y fueron diseñados por Íñigo Jones (1573-1652) entre 1638 y 1642.
Preparó el catálogo de gabinete con el título de Musaeum Tradescantianum. Legó su gabinete y su biblioteca a Elias Ashmole (1617-1692), sirviendo de base para la creación del Museo Ashmolean de Oxford, donde las colecciones de los Tradescant se han conservado prácticamente intactas.