In biochimica si definisce substrato una molecola sulla quale agisce un enzima: i substrati sono dunque le molecole di partenza nelle reazioni chimichecatalizzate dagli enzimi.
Il substrato lega il sito attivo dell'enzima, formando il complesso enzima-substrato; in seguito, il substrato è convertito in un prodotto, quindi rilasciato dal sito attivo, che diventa nuovamente pronto a ricevere il substrato.
Un esempio di substrato è il perossido di idrogeno (noto comunemente come acqua ossigenata), decomposta dall'enzima catalasi secondo la reazione:
2H2O2 → 2H2O + O2
Un altro esempio è rappresentato dall'idrolisi del saccarosio, dalla quale si ottiene glucosio e fruttosio. L'enzima attivo in questa reazione è la saccarasi, che dopo aver svolto la reazione è pronta per un'altra molecola di substrato.