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Coloração de Field

Microfotografia de uma coloração de Field mostrando melanoma maligno.

Coloração de Field é um método histológico para coloração de esfregaços de sangue. É utilizada para a coloração de esfregaços de sangue espesso, a fim de descobrir parasitas da malária.[1] A coloração de Field é uma versão da coloração de Romanowsky, usada para o processamento rápido dos espécimes.[2]

A coloração de Field usa azul de metileno e Azure 1 dissolvidos em solução tampão de fosfato e Eosina Y em solução tampão. A coloração de Field é nomeado devido ao médico John William Field, que a desenvolveu em 1941.[3]

Soluções corantes

A partir dos reagentes

Preparação das soluções 1 (ou A) e 2 (ou B) da coloração de Field a partir dos reagentes:[4]

Solução de Field 1 (ou A)

  1. Dissolver 1,6 g de azul de metileno em um litro de água destilada.
  2. Dissolver 2,6 g de Na2HPO4 (anidro) na solução do passo 1.
  3. Dissolver 1 g de azure 1 na solução do passo 2.
  4. Dissolver 2,6 g de KH2PO4 na solução do passo 3.
  5. Coloque a solução resultante sob aquecimento moderado (sem fervura) com agitação por 45 minutos a 1 hora,
  6. Deixe a solução descansar em temperatura ambiente por 24 horas.
  7. Filtre. Envase em frasco de vidro âmbar anotando a data de preparação.

Solução de Field 2 (ou B)

  1. Dissolver 2 g de eosina Y em um litro de água destilada.
  2. Dissolver 2,6 g de Na2HPO4 (anidro) na solução do passo 1.
  3. Dissolver 2,6 g de KH2PO4 na solução do passo 2.
  4. Filtre. Envase em frasco de vidro âmbar anotando a data de preparação.

A partir de misturas corantes prontas

Preparação da solução corante de Field 1 (ou A) e 2 (ou B) utilizando a mistura corante em pó comercialmente disponível.[5]

Solução de Field 1 (ou A)

  1. Pesa-se corante de Field 1 (ou A) em pó: 5 gramas
  2. Aquece-se 600 mL de água destilada a 80 ° C ou manteve-se a 60 ° C durante 30 minutos.
  3. Mistura-se o pó na água quente até se dissolver.
  4. Filtra-se a solução. Envase em frasco de vidro âmbar anotando a data de preparação.

Solução de Field 2 (ou B)

  1. Pesa-se corante de Field 2 (ou B) em pó: 4,8 gramas
  2. Aquece-se 600 mL de água destilada a 80 ° C ou manteve-se a 60 ° C durante 30 minutos.
  3. Mistura-se o pó na água quente até se dissolver.
  4. Filtra-se a solução. Envase em frasco de vidro âmbar anotando a data de preparação.

Modificações para Trichomonas e Acanthamoeba [6][7][8]

Solução A (ingredientes por litro de metanol)

  1. Fosfato dissódico 2,6 g
  2. Fosfato monopotássico 2,6 g
  3. Azul de metileno 1,6 g
  4. Azure I (Azure B) 1,6 g

Solução B (ingredientes por litro de metanol)

  1. Eosin Y 2,0 g

Protocolos de coloração

Protocolo de coloração para esfregaços sanguíneos [9]

  1. Preencher duas cubas de coloração ou outro frasco de boca larga adequado com, respectivamente:
1.1.Solução de Field A (corante azul).
1.2.Solução de Field B (corante vermelho).
  1. Faça o esfregaço sanguíneo sobre uma lâmina para microscopia e seque ao ar.
  2. Fixe em metanol por um minuto ou com a aplicação de algum fixador em spray.
  3. Seque ao ar.
  4. Mergulhe o esfregaço na solução corante de Field B (corante vermelho) por 5 a 6 segundos (este tempo, com a prática, pode ser ajustado).
  5. Lavar em água de torneira corrente.
  6. Mergulhe o esfregaço na solução corante de Field A (corante azul) por 10 a 30 segundos (este tempo, com a prática, pode ser ajustado).
  7. Lavar novamente em água de torneira corrente.
  8. Secar ao ar e o esfregaço está pronto para o exame ao microscópio.

Variação com coloração direta sobre a lâmina [10]

  1. Fixe o esfregaço em metanol anidro por um minuto. Deixe secar por evaporação.
  2. Dilua a solução corante de Field B na proporção de 1:5 com água tamponada com pH levemente alcalino.
  3. Cubra o esfregaço com a solução corante Field B diluída.
  4. Imediatamente, adicione um volume igual de solução de Field A.
  5. Misture por meio de inclinações alternadas da lâmina e deixe corar por um minuto.
  6. Lave a solução corante com água com cuidado.
  7. Limpe a superfície inferior da lâmina e deixe secar ao ar a preparação.

Protocolo para protozoários em esfregaços fecais [11]

Prepare uma diluição em pequena quantidade da solução corante B (vermelho) diluída a uma parte para 4 com água (por exemplo, 1 mL de corante para 4 mL de água).

  1. Prepare um esfregaço fecal fino na lâmina e seque ao ar.
  2. Fixe em metanol por alguns minutos.
  3. Remova o metanol e cubra o esfregaço com 1 mL (aproximadamente 20 gotas) da solução corante B diluída recentemente preparada.
  4. Imediatamente, adicione 1 mL (novamente, aproximadamente 20 gotas) da solução corante A e deixe misturar cuidadosamente os dois corantes.
  5. Permita que a coloração ocorra por um período de tempo de 1 a 2 minutos e lave cuidadosamente com água e seque ao ar.

Núcleos e flagelos são coloridos de vermelho, citoplasma em azul. Alterações morfológicas de células inflamatórias podem ser também examinadas por aplicação deste mesmo método.

Imagens adicionais

Referências

  1. ↑ Philip Bejon, Laura Andrews, Angela Hunt-Cooke, Frances Sanderson, Sarah C Gilbert and Adrian VS Hill; Thick blood film examination for Plasmodium falciparum malaria has reduced sensitivity and underestimates parasite density; Malar J. 2006; 5: 104. doi: 10.1186/1475-2875-5-104 - PMCID: PMC1636647
  2. ↑ Chunge, CN.; Ngige, S.; Bwibo, CR.; Mulega, PC.; Kilonzo, JF.; Kibati, F.; Owate, J. (agosto de 1989). «A rapid staining technique for Leishmania parasites in splenic aspirate smears.». Ann Trop Med Parasitol. 83 (4): 361–4. PMID 2481429 
  3. ↑ «Obituaries» (PDF). Medical Journal of Malaysia. Junho de 1981. Consultado em 4 de maio de 2015 
  4. ↑ Field's Stain Recipe - www.thelabrat.com
  5. ↑ Field’s stain A & Field’s stain B - www.applichem.com
  6. ↑ Pirehma, M., et al. 1999. Field's stain - a rapid staining method for Acanthamoeba spp. Parasitol. Res.; 85:791-793.
  7. ↑ Afzan, M.Y., et al. 2010. Modified Field's staining - a rapid stain for Trichomonas vaginalis. Diagn. Microbiol. Infect. Dis.; 68:159-162.
  8. ↑ MODIFIED FIELD'S STAIN KIT - catalog.hardydiagnostics.com
  9. ↑ Field Stain A and B and Preparation of the Solution - www.labpedia.net
  10. ↑ Ochei et al; Medical Laboratory Science: Theory And Practice; Tata McGraw-Hill Education, 2000. pg 963
  11. ↑ Gordon Charles Cook,Alimuddin Zumla; Manson's Tropical Diseases; Elsevier Health Sciences, 2009. - pg 1604

Ligações externas
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